La hepatitis B es una infección viral grave del hígado causada por el virus de la hepatitis B (HBV). Esta condición puede presentarse de forma asintomática, manifestarse como un cuadro agudo o evolucionar hacia una infección crónica.
En sus estadios más severos, la réplica viral sostenida induce fibrosis progresiva, derivando en cirrosis hepática y un elevado riesgo de carcinoma hepatocelular primario.
🦠 Vías de Transmisión y Relevancia Clínica
La transmisión del HBV ocurre principalmente por vía parenteral, percutánea o exposición sexual no protegida. Asimismo, la transmisión vertical (perinatal) y horizontal en la infancia representan vías críticas de propagación endémica.
Para prevenir complicaciones crónicas y cortar la cadena de contagio, el diagnóstico de laboratorio precoz mediante biomarcadores serológicos es fundamental.
🔬 Fundamento Molecular de la Técnica ELISA Directo (Sandwich)
El ensayo HBsAg ELISA es un método inmunoenzimático cualitativo directo que utiliza una arquitectura tipo "sandwich" para detectar el antígeno de superficie del virus en suero o plasma.
1. Fase de Captura y Formación del Complejo
Los pocillos de la microplaca (policubeta) se encuentran sensibilizados con anticuerpos de captura anti-HBs (provenientes de cobayo).
Al incubar la muestra del paciente, si el antígeno HBsAg está presente, este se unirá específicamente al anticuerpo inmovilizado en la fase sólida. Los componentes no fijados de la muestra se eliminan mediante una etapa rigurosa de lavado.
2. Acoplamiento del Conjugado y Revelado Cromogénico
Posteriormente, se añade el conjugado enzimático: un anticuerpo de cabra anti-HBs acoplado a la enzima peroxidasa (HRP). Este conjugado reconoce los epítopos libres del HBsAg ya capturado, completando la estructura en sandwich.
Tras eliminar el conjugado libre con un segundo ciclo de lavados, se adiciona la solución sustrato-cromógeno compuesta por tetrametilbencidina (TMB) y peróxido de hidrógeno.
3. Lectura Espectrofotométrica y Detención de la Reacción
La enzima peroxidasa cataliza la oxidación del TMB, generando una coloración celeste/azul proporcional a la cantidad de HBsAg en la muestra.
La reacción enzimática se detiene al agregar ácido sulfúrico, lo que induce un viraje del color hacia amarillo intenso. La absorbancia o densidad óptica (DO) se mide mediante un espectrofotómetro de microplacas a una longitud de onda de 450 nm.
🎥 Animación Didáctica: Paso a Paso del Test ELISA
Observa el comportamiento de los anticuerpos, antígenos y la reacción enzimática en nuestra animación explicativa:
📚 Referencias Consultadas
- World Health Organization (WHO). (2020). Guidelines on hepatitis B and C testing. World Health Organization.
- Kao, J. H. (2008). Diagnosis of hepatitis B virus infection through serological and virological markers. Gastroenterology & Hepatology, 4(12), 856–862.
- Wild, D. (Ed.). (2013). The Immunoassay Handbook: Theory and Applications of Ligand Binding, ELISA and Related Techniques (4th ed.). Elsevier.
- World Health Organization (WHO). (2017). Global hepatitis report 2017. World Health Organization.
- EASL Clinical Practice Guidelines. (2017). EASL 2017 Clinical Practice Guidelines on the management of hepatitis B virus infection. Journal of Hepatology, 67(2), 370–398.